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      matrigel基質膠的操作使用指南

      發布時間: 2022-07-20  點擊次數: 57次
         matrigel基質膠是從富含胞外基質蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取出基底膜基質,其主要成分有層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白,還包含生長因子和基質金屬蛋白酶等。它會有色差變化(淡黃色到深紅色),是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2的作用引起的,但是與5%CO2平衡后色差即會減少。
        
        1、基質膠凍融操作:
        收貨后,若不立刻使用基質膠,應馬上將仍然是冷凍固態的基質膠放進-20℃冰箱保存。使用前須先將基質膠凍融。
        
        2、凍融:
        將matrigel基質膠埋于鋪滿碎冰的冰盒中,然后將整冰盒放入4℃冰箱stayovernight溶解。(普通濃度的基質膠,溶解時間1-2天;高濃度基質膠溶解時間3-7天)。
        
        3、分裝:
        溶解后的須分裝保存,以避免反復凍融。液態基質膠,會在10℃以上快速成膠(特別是高濃度基質膠),因此,分裝時,接觸到基質膠的耗材必須預冷(如移液管、吸頭、EP管等),并且整個實驗必須無菌、冰上操作。(高濃度的基質膠比較粘稠,用移液器不好吸取,可以使用去掉針頭的預冷注射器吸取。)
        
        4、保存:
        分裝后的基質膠在冰上應仍然呈現液態,此時將基質膠放進-20℃保存即可。進行實驗時,取出分裝好的小管,4℃凍融。若分裝好后基質膠已經凝固,說明分裝操作不能很好地保持低溫,導致基質膠已經成膠,不適宜使用。
        
        5、普通濃度基質膠操作:
        細胞可在0.5mm厚度的基質膠表面生長,可以在1mm厚度的三維基質內生長。過度稀釋的基質膠會形成非膠質的蛋白層,可以用于細胞貼壁,但不能用于細胞的研究分化。為保證基質膠的成膠性能與穩定,稀釋濃度不應低于1:3,可用預冷無血清培養基稀釋,成膠后立即使用。

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