基質膠成瘤與基底膜間的相互作用是調控細胞素膠可認為是一種可溶性的基底膜基質。主要成分包括:層黏連蛋白、膠原IV等,同時含TGF-β成纖維細胞生長因子、組織纖維酶原活化因子以及其它在EHS腫瘤中自然表達的生長因子等?;|膠用于制備各種要求的基底膜基質,用于細胞信號研究,諸如:鼠腎干細胞形成腎小管過程中生長因子作用研究,鼠乳腺上皮干細胞的基因表達研究,transwell的腫瘤侵襲力實驗等。
下面我們一起去看看基質膠成瘤實驗需要準備的材料和實驗步驟:
一、實驗材料
細胞:B16-F10
培養基:含10%FBS的完全培養基
耗材:預冷槍頭、預冷離心管
其他:胰酶,PBS,Matrigengel(ABW貨號:批次a和批次b兩個批次)
二、實驗步驟
A.準備基質膠
1.4℃解凍Matrigengel,實驗前轉移到冰盒中。(注意:同樣要準備一些4℃預冷的槍頭用于吸取Matrigengel)
B.制作細胞懸液
取對數生長期的細胞,經消化、離心、計數后,用無血清培養基稀釋細胞,制成細胞懸液。分別按1:3和1:6的比例稀釋C品牌、批次a和批次b三種基質膠,并最終調整細胞密度至1×107個/mL。
C.皮下接種細胞
1.選取6-8周C57BL/6的雌性小鼠18只,每組3只。
2.分別在小鼠后背左右兩側腋下接種1×106個細胞。
3.在SPF級屏障環境的條件下飼養14天。
D.結果統計
14天后取出腫瘤,稱取重量。