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      ABW基質膠在類器官(PDO)培養實驗中的應用

      發布時間: 2022-06-07  點擊次數: 133次
         ABW基質膠是從富含胞外基質蛋白的小鼠腫瘤細胞中提取出基底膜基質,其主要成分有層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白,還包含生長因子和基質金屬蛋白酶等。在室溫條件下,Matrigengel聚合形成具有生物學活性的三維基質,模擬體內細胞基底膜的結構、組成、物理特性和功能,有利于體外細胞的培養和分化,可用于對細胞形態、生化功能、遷移、侵染和基因表達等的研究。
        
        類器官是一個在Matrigengel的支撐下形成三維“微器官模型”,可以模擬天然器官的結構和功能。與傳統的二維培養模型相比,類器官可以模擬出整個生物體的生理過程,具有更接近體內細胞組成和行為,基因組更穩定,更適合生物轉染和高通量篩選的優點。與動物模型相比,類器官模型的操作不僅更簡單,而且快速成型,兩到三周即可得到所需數據。
        一、實驗材料:
        細胞:病人腫瘤細胞
        培養基:F12K/DMEM培養基,PDO培養基
        耗材:預冷槍頭、預熱24孔板、預冷0.5ml離心管
        其它:Matrigengel(ABW貨號0827035)
        
        二、實驗步驟:
        A.實驗準備
        1.提前24h將Matrigengel放置于4°冰箱慢慢融化,(為避免反復凍融,收到貨以后分裝成小規格保存,于-20°保存)
        2.需要提前制冰。
        B.細胞獲?。簭尼t院將病人的腫瘤組織,快速按照獲取原代細胞的方法操作,獲得腫瘤細胞。
        C.細胞種板:
        1.按每孔5000個細胞稀釋,將細胞懸液放置在冰上,按照比例加入Matrigengel,混合均勻,將混合液滴入10ul-20ul到24孔板底部,每孔約3-4滴。
        2.將培養板放入37°培養箱中,孵育30min,待Matrigengel凝固。
        3.準備所需量PDO培養基,放入37°水浴鍋預熱。
        4.膠滴凝固以后,每孔加入500ul培養基。
        5.將培養板放會培養箱中繼續培養。
        6.每隔兩天采集圖像記錄。

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