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      matrigel基質膠的使用方法

      發布時間: 2022-05-13  點擊次數: 234次
         matrigel基質膠從富含胞外基質蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取出基底膜基質,其主要成分有層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、肝素糖蛋白,還包含生長因子和基質金屬蛋白酶等。在室溫條件下,聚合形成具有生物學活性的三維基質,模擬體內細胞基底膜的結構、組成、物理特性和功能,有利于體外細胞的培養和分化,以及對細胞形態、生化功能、遷移、侵染和基因表達研究。
        
        產品特性:
        Matrigel基質會有色差變化(淡黃色到深紅色),是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2作用引起的,但是與5%CO2平衡后色差即會減少。凍融后,輕輕搖晃試劑瓶使Matrigel分散均勻。所有操作均需在無菌環境下進行,試劑瓶瓶蓋可用70%乙醇擦拭,并自然干燥。應使用預冷的移液器以保證Matrigel呈勻漿狀。細胞可在0.5mm厚度的Matrigel基質層表面生長,也可在1mm厚度的Matrigel三維基質內生長。過度稀釋的Matrigel會形成非膠質的蛋白層,可以用于細胞貼壁,但不能用于細胞的分化研究。
        
        matrigel基質膠的使用方法:
        特別注意:基質膠在22-35℃能夠快速成膠。為了保證Matrixgel基質的成膠性能與穩定性,最終稀釋濃度不應低于3mg/ml(液的濃度因批次不同有差異)??捎脽o血清培養基來稀釋Matrixgel,稀釋后需要立即使用。
        A.薄膠制備方法
        1)融化后,用預冷的槍頭混勻Matrixgel基質。
        2)將需要使用的培養板置于冰上,按50μL/cm2生長面積的濃度加入Matrixgel基質。
        3)在37℃放置30分鐘,此時平板即可使用。
        
        B.厚膠制備方法
        1)融化后,用預冷的槍頭混勻Matrixgel基質。
        2)將需要使用的培養板置于冰上,將培養的細胞與Matrixgel基質混合,用遇冷的槍頭使細胞懸浮均勻。按照150-200μL/c的濃度加入Matrixgel基質。
        3)在37℃放置30分鐘,此時即可加入細胞培養液。細胞也可生長在此厚膠的上層。
        
        C.薄層包被方法
        1)融化后,用預冷的槍頭混勻Matrixgel基質。
        2)采用無血清培養基稀釋Matrixgel基質到需要的濃度。建議根據具體的實驗做個梯度實驗,從而確定最佳的包被濃度。
        3)將稀釋的Matrixgel基質加入需要包被的培養器皿中,包被量至少覆蓋細胞的所有生長表面。室溫下孵育1小時。
        4)去除未凝固結合的Matrixgel基質,用無血清培養基輕輕地沖洗。此時平板即可使用。

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